微滴式數(shù)字PCR儀是一種核酸分子一致定量技術(shù)。目前有三種方法用于核酸分子的定量，普通PCR半定量通過(guò)灰度進(jìn)行定量；熒光定量PCR通過(guò)Ct(Cq)值進(jìn)行相對(duì)定量；數(shù)字PCR是較新的定量技術(shù)，基于單分子PCR方法來(lái)進(jìn)行計(jì)數(shù)的核酸定量，是一種一致定量的方法。主要采用微滴化方法，將大量稀釋后的核酸溶液分散至芯片的微反應(yīng)器或微滴中，每個(gè)反應(yīng)器的核酸模板數(shù)少于或者等于1個(gè)。這樣經(jīng)過(guò)PCR循環(huán)之后，有一個(gè)核酸分子模板的反應(yīng)器就會(huì)給出熒光信號(hào)，沒(méi)有模板的反應(yīng)器就沒(méi)有熒光信號(hào)。根據(jù)數(shù)字PCR反應(yīng)單元總數(shù)和有熒光信號(hào)的單元數(shù)以及樣品的稀釋倍系數(shù)，就可以得到樣本的最初拷貝數(shù)(濃度)。

 

　　微滴式數(shù)字PCR儀的保養(yǎng)：

　　1、樣品池的清洗：先打開(kāi)蓋子，然后用95%乙醇或10%清洗液浸泡樣品池5min，然后清洗被污染的孔；用微量移液器吸取液體，用棉簽吸干剩余液體；打開(kāi)PCR儀，設(shè)定保持溫度為50℃的PCR程序并使之運(yùn)行，讓殘余液體揮發(fā)去除。一般5～10min即可。

　　2、熱蓋的清洗：對(duì)于數(shù)字PCR儀，當(dāng)有污染出現(xiàn)，而且這一污染并非來(lái)自樣品池時(shí)；或當(dāng)有污染或殘跡物影響到熱蓋的松緊時(shí)，需要用壓縮空氣或純水清洗墊蓋底面，確保樣品池的孔鏡干凈，無(wú)污物阻擋光路。

　　3、儀器外表面的清洗：清洗儀器的外表面可以除去灰塵和油脂，但達(dá)不到消毒的效果。選擇沒(méi)有腐蝕性的清洗劑對(duì)PCR儀的外表面進(jìn)行清洗。

　　4、更換保險(xiǎn)絲：先將PCR儀關(guān)機(jī)，拔去插頭，打開(kāi)電源插口旁邊的保險(xiǎn)盒，換上備用的保險(xiǎn)絲，觀察是否恢復(fù)正常。

 

　　維修：

　　1、PCR儀器需要定期檢測(cè)，視制冷方式而定一般半年至少一次。

　　2、PCR反應(yīng)的要求溫度與實(shí)際分布的反應(yīng)溫度是不一致的，當(dāng)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)各孔平均溫度差偏離設(shè)置溫度大于1～2℃時(shí)，可以運(yùn)用溫度修正法糾正PCR實(shí)際反應(yīng)溫度差。

　　3、PCR反應(yīng)過(guò)程的關(guān)鍵是升、降溫過(guò)程的時(shí)間控制，要求越短越好，當(dāng)PCR儀的降溫過(guò)程超過(guò)60s，就應(yīng)該檢查儀器的制冷系統(tǒng)，對(duì)風(fēng)冷制冷的PCR儀要較*地清理反應(yīng)底座的灰塵；對(duì)其他制冷系統(tǒng)應(yīng)檢查相關(guān)的制冷部件。

　　4、一般情況如能采用溫度修正法糾正儀器的溫度時(shí)，不要輕易打開(kāi)或調(diào)整數(shù)字PCR儀的電子控制部件，必要時(shí)要請(qǐng)專(zhuān)業(yè)人員修理或利用儀器電子線路詳細(xì)圖紙進(jìn)行維修。